User:Selvaganapathiselva

ரூட் நோட்யூல்கள் வரை ரைசோபியுமியின் தனிமை

Diazotrophic பாக்டீரியாவிற்கும் தாவரங்களுக்கும் இடையிலான ஒத்துழைப்பு அமைப்புகளை உருவாக்கும் ரூட் நோடில் மண் சார்ந்த சுற்றுச்சூழலில் நிலையான நைட்ரஜனின் முதன்மை உயிரியல் பங்களிப்புகள் ஆகும். இந்த சங்கங்கள் ரைசோபியம் - பற்பசை மற்றும் ஃபிராங்கியா- ஆக்டினோரைசல் சிம்போயோசஸ் ஆகியவை அடங்கும். இந்த இரண்டு, ரைசோபியம் - பருமனான சிம்போயிஸ் மிகவும் ஆய்வு ஒன்று. ஏறக்குறைய 700 மரபுகள் மற்றும் சுமார் 13,000 இனங்கள் உள்ளன. இது ஒரு பகுதி மட்டுமே வளிமண்டல நைட்ரஜனை சரிசெய்ய புகார் செய்யப்பட்டுள்ளது.

பாக்டீரியா சிம்பொனிட்டுகள் கிராம் எதிர்மறையானவை, கோளாறுகள் அல்லாதவை, காற்றோட்டக் கம்பிகள் மற்றும் பாக்டீரியா இனங்கள் ஆகியவை மரபணு ரைசோபியம், பிராடிரைசோபியம், மீசோரிசோபியம், ஃபோட்டோரிசோபியம், சினோரிசோபியுபியம் மற்றும் அசோரிசோபியம் ஆகியவையாகும். வருடாந்திர பயிர்களில், இந்த பாக்டீரியாவின் வேகமானது குறுக்கு திசுக்கட்டமைப்பு குழுவினால் வரையறுக்கப்படுவதால் ஹோஸ்ட்டின் சிறப்பம்சத்தை அடிப்படையாகக் கொண்டது.

தேவையான பொருட்கள்

• நச்சுத்தன்மையுடைய தாவரங்களை நன்றாக nodulated

• எத்தனால் (70%)

• கத்திரிக்காய், ஃபோர்செப்ஸ் மற்றும் கண்ணாடி கம்பி, Petriplates, மலட்டு நீர் வெற்றிடங்கள்

செயல்முறை

1. ஆலை மற்றும் கழுவும் வேர்களை நன்கு துடைக்கவும்.

2. சேதமடையாமல் ஆலைகளிலிருந்து சேகரிப்பை சேகரிக்கவும்.

இளஞ்சிவப்பு மற்றும் ஆரோக்கியமான முடிச்சுகளைத் தேர்ந்தெடுங்கள்.

4. மேற்பரப்பு 70% எத்தனால் 1-3 நிமிடம் நீரில் மூழ்கடிப்பதன் மூலம் முனைப்புக்களைக் கொளுத்தவும்

5. மலட்டுத்தசை நீரில் துடைக்க வேண்டும்.

6. மேற்பரப்பு நொதிகளை மீண்டும் 0.1% (W / V) மர்ம குளோரைடு 2-3 நிமிடம்

7. மலச்சிக்கல் நீரில் 3 முறை முளைக்க வேண்டும்.

8. கண்ணாடி கம்பியைப் பயன்படுத்தி மலட்டுத் தண்ணீரில் சிறிய அளவிலான நொதிலை நசுக்கியதன் மூலம் நொடோல் இடைநீக்கம் தயாரிக்கவும்.

9. ஒரு மிக் nodule இடைநிறுத்தம் ஒரு மலட்டு பெட்ரி தட்டு பரிமாற்றம் மற்றும் காங்கோ ரெட் ஈஸ்ட் பிரித்தெடுத்தல் Mannitol அகர் நடுத்தர மற்றும் 3-5 நாட்கள் அறை வெப்பநிலையில் அடைகாக்கும் 15-20 மில்லி சேர்க்க.

10. வெள்ளை ஒளிஊடுருவக்கூடிய காலனிகளில் தோற்றம் ரைசோபியத்தை குறிக்கிறது. சிவப்பு வண்ணம், சிறிய காலனிகள் அக்ரோபாக்டீரியம்.

சுத்திகரிப்பு

ரைசோபிய காலனி ஒரு சுவையூட்டல் தடுப்பூசி ஊசி எடுத்து சுத்திகரிக்க புதிய ஈஸ்ட் சாறு Mannitol Agar தகடுகள் மீது streaked. ரைஜோபியாவின் சுத்திகரிக்கப்பட்ட கலாச்சாரங்கள் அதே நடுத்தர வயதினரின் வேகத்தோடு பராமரிக்கப்படுகின்றன. தனிமைப்படுத்தப்பட்ட பின்னர், விகாரங்கள் தூய்மைப்படுத்தப்பட்டு பின்னர் அங்கீகரிக்கப்படுகின்றன. இதற்கு, பின்வரும் சோதனைகள் செய்யப்படுகின்றன.

முன்னறிவிப்பு சோதனைகள்

ஒரு) காலனி பாத்திரத்தை கவனிப்பதற்காக YEMA (ஈஸ்ட்ஸ்ட்ரட் மேன்டிட்டல் அகர்) இல் வளர்ச்சி

b) வளர்ச்சியை உறுதிப்படுத்துவதற்காக CRYEMA (காங்கோ ரெட் ஈஸ்ட்ஸ்ட் எக்ஸ்ட்ரக் மானிட்டல் அகர்) வளர்ச்சி

கேட்ச்) BTB YEMA (BromoThymol Blue Yeast Extract Mannitol Agar) வளர்ச்சியில் இது ஒரு வேகமான உற்பத்தியாளரா அல்லது மெதுவாக உற்பத்தி செய்கிறதா என்பதை கவனிப்பதற்கான நடுத்தர

d) அசுத்தங்களைக் குறிப்பிடுவதற்கு குளுக்கோஸ் பெப்டன் அஜார் நடுத்தரத்தில் வளர்ச்சி

இ) அது ரைசோபியம் அல்லது அக்ரோபாக்டீரியம் என்பதை உறுதிப்படுத்துவதற்காக ஹோஃபர் கார்பாலில் உள்ள குழாயின் வளர்ச்சி

f) கிராம் ஒட்டும்

அங்கீகார சோதனை

அதன் செயல்திறனை உறுதிப்படுத்துவதற்கான குறியீட்டு சோதனை

ஒரு) CRYEMA நடுத்தர வளர்ச்சி

CRYEMA தட்டில் ரைசோபியம் ஸ்ட்ரீக் தரத்தை பரிசோதிப்பது பயனுள்ளதாக இருக்கும். பொதுவாக, ரைசோபியா சருமத்தை பலவீனமாக உட்கொள்கிறது, அதே சமயம் பொதுவான மண் பாக்டீரியாக்கள் பலவற்றை வலுவாக எடுத்துக் கொள்கின்றன. பின்வருமாறு பயன்படுத்தப்படும் ஊடகம்:

காங்கோ ரெட் ஈஸ்ட்ஸ்ட் மானிட்டல் அகர் நடுத்தர

ஈஸ்ட் பிரிகேட் பவர் 1.0 கிராம்

மானிட்டோல் 10.0 கிராம்

MgSO4.7 H20 0.2 கிராம்

K2HPO4 0.5 கிராம்

காங்கோ ரெட் (1% தீர்வு) 2.5 மிலி

NaCl 0.1 கிராம்

அகர் 20.0 கிராம்

வடிகட்டிய நீர் 1000 மிலி

pH 7.0 + 0.2

காங்கோ சிவப்புத் தீர்வு மற்றும் அகார் ஆகியவற்றிற்கு முன்னதாக pH ஐ சரிசெய்ய வேண்டும். 15 நிமிடங்கள் 121oC இல் autoclaving மூலம் நடுத்தர தூண்ட. செயல்முறை பின்வருமாறு:

செயல்முறை

1. 106 முதல் 109 வரையிலான ஒழுங்கமைப்பைத் தக்கவைக்க குழாயின் பண்பாட்டை சீராகச் செய்யவும்.

2. CRYEMA நடுத்தர மீதான விலாசங்களின் 0.2 மில்லி தட்டுகள் மற்றும் அறை வெப்பநிலையில் 2-7 நாட்களுக்கு தாள்களை இடுவதால், ரைசோபியத்தின் இனங்கள் பொருந்துகின்றன.

3. பின்வரும் முன்வைப்புகள் செய்யப்பட வேண்டும்

a) வடிவம் - வட்ட

b) ஒவ்வொரு காலனியின் உயரமும் - எழுப்பப்பட்டு குவிந்து கிடக்கிறது

c) எட்ஜ் - முழு

ஈ) தோற்றம் - வெளிப்படையான, நிறமற்ற மற்றும் பிரகாசம். கொங்கோ ரெட்ஸில் அசோடெபாக்டெர் போன்ற அசுத்தங்களின் நிறம் இளஞ்சிவப்பு மற்றும் சூடோமோனாஸ் அல்லது ஆகிரோமபேக்கர் ஆகியவற்றின் நிறம் சிவப்பாகும்.

ப) குளுக்கோஸ் பெப்டோன் அஜார் நடுத்தர வளர்ச்சி

குளுக்கோஸ் பெப்டன் பெரும்பாலான ரைசோபியா வளர்ச்சியை ஆதரிக்கவில்லை, ஆனால் பல அசுத்தங்கள் உடனடியாக வளர்ந்து pH மாற்றங்களை உருவாக்குகின்றன. சில சந்தர்ப்பங்களில், ரைசோபியாவின் சில விகாரங்கள் குளுக்கோஸ் பெப்டோன் அகார் மீது மிகக் குறைந்த அல்லது குறைவான வளர்ச்சியைக் காட்டுகின்றன, ஆனால் பிஹெச் இல் கணிசமான மாற்றம் இல்லை. பின்வருமாறு சோதனை மேற்கொள்ளப்படுகிறது:

குளுக்கோஸ் பெப்டோன் அகர்

குளுக்கோஸ் 5.0 கிராம்

பெப்டோன் 10.0 கிராம்

ப்ரோமோ க்ரெரோல் ஊதா (1% மது அருந்துதல்) 10.0 மிலி

அகர் 20.0 கிராம்

வடிகட்டிய நீர் 1000 மிலி

pH 7.0 + 0.2

செயல்முறை

1. நடுத்தர சாய்வு ஒரு உயிரின உயிரினத்தை ஸ்ட்ரீக்.

2. 28-30oC மணிக்கு Incubate.

3. 24 மணித்தியாலத்திற்கும் 48 மணித்தியாலத்திற்கும் இடையில் ஆய்வு செய்தல்.

4. வளர்ச்சிக்கு விழிப்புணர்வு.

5. ரைசோபியம் இந்த நடுத்தரத்தில் மோசமாக வளர்ந்து பி.ஹெ.

c) ஹோஃபர்'ஸ் ஆல்கலீன் குழியில் வளர்ச்சி

அக்ரோபாக்டீரியம் உயர் pH மட்டங்களில் வளரும் என்ற உண்மையை அடிப்படையாகக் கொண்டது, ரைசோபியா அவ்வாறு செய்ய முடியாது. 11.0 என்ற உயர் பிஹே என்ற நடுத்தர இந்த நோக்கத்திற்காக நோடூல் பாக்டீரியாவின் புதிய தனிமங்களைத் திரட்ட பயன்படுகிறது.

ஹாஃபர்'ஸ் ஆல்கலைன் புளிப்பு

மானிட்டோல் 10.0 கிராம்

ஈஸ்ட் சாறு 1.0 கிராம்

K2HPO4 0.5 கிராம்

MgSO4 0.2 கிராம்

NaCl 0.1 கிராம்

CaCO3 0.05 கிராம்

வடிகட்டிய நீர் 1000 மிலி

பி.எச்